什么是凝膠電泳

那么下面為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于什么是凝膠電泳：

電泳是實(shí)驗室中常用的一種技術(shù)，用于根據大小分離帶電分子，例如DNA。

凝膠電泳是實(shí)驗室中常用的一種技術(shù)，用于分離帶電分子，例如DNA ，RNA 和蛋白質(zhì)。根據它們的大小。

當電流通過(guò)凝膠時(shí)，帶電分子穿過(guò)凝膠。

在凝膠上施加電流，以使凝膠的一端帶正電荷，而另一端帶負電荷。

帶電分子的運動(dòng)稱(chēng)為遷移。分子向相反電荷遷移。因此，帶負電荷的分子將被拉向正末端（相反的方向吸引?。?。

凝膠由可滲透的基質(zhì)（有點(diǎn)像篩子）組成，當電流通過(guò)時(shí)，分子可以穿過(guò)該基質(zhì)。

較小的分子在凝膠中的遷移速度更快，因此比較大的分子遷移速度更慢，因此遷移距離更短，因此較大的分子可以遷移。結果，分子按大小分開(kāi)。

凝膠電泳和DNA

電泳使您能夠區分不同長(cháng)度的DNA片段。

DNA帶負電，因此，當電流施加到凝膠上時(shí)，DNA會(huì )向帶正電的電極遷移。

較短的DNA鏈比較長(cháng)的DNA鏈穿過(guò)凝膠的速度更快，從而導致片段按大小順序排列。

使用染料，發(fā)熒光？標簽還是放射性的？標記使分離后的凝膠上的DNA可見(jiàn)。它們將在凝膠上顯示為條帶。

具有已知長(cháng)度片段的DNA標記通常與樣品同時(shí)在凝膠中穿行。

通過(guò)將DNA樣品的條帶與DNA標記的條帶進(jìn)行比較，可以算出樣品中DNA片段的大致長(cháng)度。

凝膠電泳如何進(jìn)行？

準備凝膠

瓊脂糖凝膠？通常用于可視化DNA片段。用于制作凝膠的瓊脂糖濃度取決于您正在使用的DNA片段的大小。

瓊脂糖濃度越高，基質(zhì)越致密，反之亦然。較小的DNA片段在較高濃度的瓊脂糖上分離，而較大的分子需要較低濃度的瓊脂糖。

為了制備凝膠，將瓊脂糖粉與電泳緩沖液混合并加熱至高溫，直到所有瓊脂糖粉融化為止。

然后將熔化的凝膠倒入凝膠澆鑄盤(pán)中，并在一端放置一個(gè)“梳子”，以制成用于移液的孔。

凝膠冷卻并固化后（現在將是不透明而不是透明的），將梳子移開(kāi)。

現在，許多人都使用預制的凝膠。

然后將凝膠放入電泳槽中，并將電泳緩沖液倒入槽中，直到覆蓋凝膠表面為止。緩沖器傳導電流。所用緩沖液的類(lèi)型取決于樣品中DNA片段的大致大小。

準備用于電泳的DNA

在電泳之前將染料添加到DNA樣品中，以增加樣品的粘度，這將防止其浮出孔，從而可以看到樣品通過(guò)凝膠的遷移。

將DNA標記物（也稱(chēng)為大小標準品或DNA階梯）裝入凝膠的**個(gè)孔中。標記中的片段長(cháng)度已知，因此可用于幫助估計樣品中片段的大小。

然后將制備的DNA樣品吸移到凝膠的其余孔中。

完成此操作后，將蓋子放在電泳槽上，確保凝膠以及正負電極的方向正確（我們希望DNA跨凝膠遷移至正端）。

分離碎片

然后打開(kāi)電流，使帶負電荷的DNA穿過(guò)凝膠向凝膠的正側移動(dòng)。

較短長(cháng)度的DNA移動(dòng)的速度快于較長(cháng)長(cháng)度的DNA，因此在運行電流時(shí)移動(dòng)的距離更遠。

DNA遷移到凝膠中的距離可以通過(guò)監視上樣緩沖液染料的遷移來(lái)直觀(guān)判斷。

留下的電流要足夠長(cháng)，以確保DNA片段在凝膠上移動(dòng)的距離足以將它們分開(kāi)，但不要過(guò)長(cháng)以至于它們從凝膠末端流出。

用于按大小分離DNA片段的DNA電泳設備插圖。凝膠位于緩沖罐中。將DNA樣品置于凝膠一端的孔中，并且電流流過(guò)凝膠。帶負電荷的DNA向正電極移動(dòng)。圖片來(lái)源：Genome Research Limited

可視化結果

一旦DNA在凝膠上遷移足夠遠，就將電流切斷，并將凝膠從電泳槽中移出。

為了使DNA可視化，用與DNA結合的熒光染料對凝膠進(jìn)行染色，然后將其放在紫外透射儀上，該透射儀將被染色的DNA顯示為亮帶。

或者，染料可以在倒入之前與凝膠混合。

如果凝膠正確運行，將可見(jiàn)DNA標記物/大小標準品的條帶模式。

然后可以通過(guò)想象一條橫穿DNA標記帶的水平線(xiàn)來(lái)判斷樣品中DNA的大小。然后，您可以通過(guò)將它們與標記中**接近的條帶進(jìn)行匹配來(lái)估計樣品中DNA的大小。

顯示脫氧核糖核酸帶的例證在凝膠分離了。將DNA片段的長(cháng)度與包含已知長(cháng)度的片段的標記進(jìn)行比較。