紫外可見(jiàn)分光光度計的校正方法

• 對于雙光束分光光度計而言在使用前必須要做基線(xiàn)校正(也稱(chēng)為基線(xiàn)記憶)，對于此項工作的原理和操作方法許多使用者的認識不盡相同；為此談?wù)勎覀兊恼J識。

  
  

  (一)為何要做基線(xiàn)校正?

  光度計的光學(xué)系統基本是由光源(氘燈、鎢燈)、單色器(光柵、狹縫)、檢測器(光敏二極管、光電倍增管)等三部分組成的。在我們使用的波長(cháng)區域中(一般紫外可見(jiàn)儀器均在190nm-1100nm范圍里，)上述部件在不同的波長(cháng)下的響應值(光源的發(fā)射強度、單色器的色散強度、檢測器的放大倍數)均不相同；通俗地說(shuō)、即使沒(méi)有樣品，儀器如果不做基線(xiàn)校正，那么在190nm至1100nm的范圍中，吸光值或透過(guò)率不會(huì )是一條直線(xiàn)，這是一種客觀(guān)的物理現象。

  
  

  (二)被校正的基線(xiàn)種類(lèi)和用途

  (1)系統基線(xiàn)：

  所謂系統基線(xiàn)就是儀器固有的波長(cháng)范圍的總基線(xiàn)；例如一臺儀器出廠(chǎng)設計的波長(cháng)全程范圍是190nm至1100nm，那么它的系統基線(xiàn)就是這個(gè)范圍。一般來(lái)講，作為分析人員對一臺儀器做全程掃描測試是比較少見(jiàn)的；之所以要做系統基線(xiàn)的目的一般是將儀器的光學(xué)系統的響應值校正到基本一致；這就類(lèi)似馬拉松賽跑一樣，只要大家在同一起跑處(注意：不是起跑線(xiàn))比賽，前后差幾米出發(fā)無(wú)所謂。

  
  

  (2)用戶(hù)基線(xiàn)：

  所謂用戶(hù)基線(xiàn)就是分析者自己設定的測量波長(cháng)區域的一段基線(xiàn)；由于這是分析所需要的區域，為了保證測試的準確性，故用戶(hù)基線(xiàn)的校正是非常重要和必要的；這就類(lèi)似百米賽跑一樣，運動(dòng)員要在同一個(gè)起跑線(xiàn)上比賽而不能搶跑，否則無(wú)法準確計算成績(jì)。

  
  

• (三)基線(xiàn)校正的方法

  (1) 系統基線(xiàn)：

  系統基線(xiàn)的校正較為簡(jiǎn)單，一般情況下樣品室內不放樣品，僅做光學(xué)系統的校正；如果一定要使用全波段的測量那另當別論。同時(shí)需要注意的是：系統基線(xiàn)無(wú)需經(jīng) 常校正，一般半個(gè)月或一個(gè)月校正校正一次即可。對有的儀器來(lái)說(shuō)，系統基線(xiàn)校正過(guò)于頻繁反而會(huì )造成基線(xiàn)漂移嚴重。

  
  

  (2) 用戶(hù)基線(xiàn)校正：

  正確的校正方法是：

  兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中，校正波長(cháng)范圍要大于分析波長(cháng)范圍；例如、分析設定范圍為220nm-500nm，那么校正波長(cháng)就要設定為210nm-510nm；等待校正結束后再將波長(cháng)設定回到原來(lái)的220nm-500nm范圍。

  
  

  這種校正方法的優(yōu)點(diǎn)是：

  如果校正波長(cháng)與分析波長(cháng)*吻合一致，有可能在校正后的基線(xiàn)兩端出現大的噪聲；如果校正范圍大于實(shí)際分析范圍并掐頭去尾后可以提高分析精度。關(guān)于這種校正方法，許多使用者往往不知曉或忽略掉了。

  
  

  值得注意的是，有的儀器操作者在做基線(xiàn)校正時(shí)，參比一側不放參比溶液，也就是用空氣來(lái)做參比對照。這種方法在可見(jiàn)區對有的樣品也許有時(shí)影響不大，但在紫外區影響就會(huì )很明顯了。嚴格的說(shuō)，用空氣做參比所測得的結果不是真正意義上的校正光譜。

  
  

  (四)基線(xiàn)校正的注意事項

  (1) 基線(xiàn)校正時(shí)要保證儀器有一定的預熱時(shí)間；

  (2) 每更換一種參比溶液后均要重新做基線(xiàn)校正；

  (3) 如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時(shí)測試結果會(huì )出現負值，此時(shí)要考慮使用何種溶液做基線(xiàn)校正了。

  
  

• 紫外可見(jiàn)分光光度計問(wèn)題處理：

  1、執行了自動(dòng)調零后儀器處于什么狀態(tài)？

  自動(dòng)調零把當前固定波長(cháng)的光度讀數調節為0或者1**%，取決于測定的方式。使用自動(dòng)調零減去了空白讀數。通常，在單個(gè)固定波長(cháng)測定時(shí)使用自動(dòng)調零，如果是多波長(cháng)測定，應該執行基線(xiàn)校正。

  
  

  2、為什么執行自動(dòng)調零后光譜仍然沒(méi)有得到有效的校正？

  因為自動(dòng)調零只校正一個(gè)點(diǎn)；要校正光譜范圍，需要進(jìn)行基線(xiàn)校正或精細的基線(xiàn)校正。精細的基線(xiàn)校正應該定期進(jìn)行，一般每月一次，在樣品室中不必放任何容器。

  
  

  3、基線(xiàn)校正后儀器的狀態(tài)如何？

  基線(xiàn)校使時(shí)儀器在制定得波長(cháng)范圍內的光譜讀數調整為零。

  
  

  4、為什么基線(xiàn)校正不能正常起作用？

  是否樣品室中放了樣品?基線(xiàn)校正時(shí)有三種選擇，可確?；€(xiàn)校正的正常。

  ①樣品室池架內空置(空氣對空氣)。此時(shí)校正儀器的基線(xiàn)，特別適合精細的基線(xiàn)校正。

  ②樣品池中放入溶劑，參比側空置。

  ③樣品和參比池中都放入溶劑。

  
  

  做基線(xiàn)校正時(shí)要考慮試劑的使用波長(cháng)范圍問(wèn)題，因為有的試劑在某個(gè)波長(cháng)以下的吸光度值會(huì )無(wú)限大，這時(shí)去做校正會(huì )超出儀器的有效量程范圍，無(wú)法得到真正的結果。關(guān)于試劑的使用波長(cháng)范圍，目前一般在試劑瓶的標簽上會(huì )有標注。