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一、差速離心法(又稱(chēng)分步離心法) 采用不同的離心速度和離心時(shí)間,使沉降速度不同的顆粒分步離心的方法,稱(chēng)為差速離心。操作時(shí),將含有兩種不同顆粒的混懸液,以常速離心,使大的顆粒下沉,將上清液傾倒于另一離心管中,再加大離心力,離心一定時(shí)間,分離小的顆粒,反復多次分離,達到分離目的。差速離心主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。差速離心法的優(yōu)點(diǎn)是:操作簡(jiǎn)單,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開(kāi),并可使用容量較大的角式轉子;分離時(shí)間短、重復性高;樣品處理量大。缺點(diǎn)是:分辨率有限、分離效果差,沉淀系數在同一個(gè)數量級內的各種粒子不容易分開(kāi),不能一次得到純顆粒;壁效應嚴重,特別是當顆粒很大或濃度很高時(shí),在離心管一側會(huì )出現沉淀;顆粒被擠壓,離心力過(guò)大、離心時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )使顆粒變形、聚集而失活。
二、速率區帶離心法:是根據分離的粒子在離心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,離心后具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內形成幾條分開(kāi)的樣品區帶,達到彼此分離的目的。臨床常使用的分離液是Ficoll、Percoll及蔗糖。把靜脈血中單個(gè)核細胞分離出來(lái),前一種分離液將血液中單個(gè)核細胞(淋巴細胞和單核細胞)分為一個(gè)層,同時(shí)提出。而Percoll分離液將血中淋巴細胞和單核細胞分為二個(gè)梯度層,分別提取。后者分離效果優(yōu)于前者,但操作繁瑣。